WesternBlot•原理•分类•主要试剂•操作步骤•常见问题原理WesternBlot（蛋白免疫印迹）采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标...
2011-5-7WB实验技术及常见问题分析WesternBlot定义WesternBlot中文一般称为蛋白质印迹通过聚丙烯酰胺电泳根据分子量大小分离蛋白后转移到杂交膜上分离的蛋白可以通过一抗/二抗复合物进行检测是蛋白质分析的最流行的技术之一WesternBlot操作流程蛋白样品的制备（蛋白抽提、定量）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE凝胶制备、上样）转膜封闭一抗杂交二抗杂交底物显色水溶液提取法针对水、稀盐、稀酸或碱溶...
WesternBlot实验技术WesternBlot原理WesternBlot采用的是变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离蛋白质混合物，经过SDS-PAGE分离的蛋白质被到转移到固相支撑物（NC膜，PVDF膜等）上后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持膜上蛋白质或多肽的抗原性质不变，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与其对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的二抗体起反应，经过底物显色以检测特异蛋白质表达水平。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳原...
WesternBlot实验技术一、原理WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。通过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相应的抗体起免疫反映，再与酶、荧光或同位素标记的第二抗体起反映，通过底物显色或放射自显影以...
蛋白质印迹（WesternBlot）试验方案溶液和试剂裂解缓冲液这些缓冲液可在4℃下保留数周，或者以分装形式在-20℃下保留长达1年。Nonidet-P40(NP40)缓冲液150mMNaCl1.0%NP40（可用0.1%TritonX-100替代）50mMTris-HClpH8.0蛋白酶克制剂RIPA缓冲液（放射免疫沉淀试验缓冲液）150mMNaCl1.0%NP-40或0.1%TritonX-1000.5%脱氧胆酸钠0.1%SDS（十二烷基硫酸钠）50mMTris-HClpH8.0蛋白酶克制剂Tris-HCl缓冲液20mMTris-HClpH7.5蛋白酶克制剂...
蛋白免疫印迹杂交〔WesternBlot〕技术手册A蛋白样本提取制备蛋白样品制备是WesternBlotting的第一步，更是打算WB成败的关键步骤，总体原则和留意事项：1：尽可能提取完全或降低样本简洁度只集中于提取目的蛋白〔通过承受不同提取方法或选择不同的试剂盒产品〕2：保持蛋白的处于溶解状态〔通过裂解液的PH盐浓度外表活性剂、复原剂等的选择〕3：提取过程防止蛋白降解、聚拢、沉淀、修饰等，〔低温操作，参与适宜的蛋白酶和磷酸酶...
WesternBlot配方和方法WesternBlot配液：1.10%SDS溶液(m/v)：SDS0.1gDDHO1ml2加热溶解，室温保存，用后马上拧紧瓶盖。2.10%过硫酸铵:APS0.1gDDHO1ml2由于过硫胺酸会缓慢分解，最好颖配制，或隔周配制〔也可每200微升EP分装，4℃保存4W，-20℃保存1月〕3.1×电泳缓冲液Trisbase3.028gGlycine14.4gSDS1.0g用蒸馏水溶解至1000ml，调整PH8.3。冰箱内可保存数月。4.10×转膜液〔储存液〕甘氨酸72.07gTrisbase15.14gDDHO400ml2加水至5...
四、WESTBLOTTINGWesternBlot详解(原理、分类、试剂、步骤及问题解答)Western免疫印迹〔WesternBlot〕是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进展检测。对表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进展检测，对基因的表达产物，可通过融合局部的抗体检测。本文主要通过以下几个方面来具体地介绍一下WesternBlot技术:一、原理二、分类i.放射自显影ii.底物化学发光ECLECFiv.底物DAB呈色三、主要试剂四、主要步骤五、试验常见的问题指南1.参考...
生物医药基地WesternBlot技术手册Tris-Base15.1g甘氨酸〔Glycine〕94gSDS5g甘氨酸(Glycine)2.9gTris-Base5.8gSDS0.37g甲醇200ml1.WesternBlot主要试剂的配方1.15×电泳缓冲液配方(1L)留意事项：a.加水时应尽量避开气泡的产生，否则会造成过多SDS的损耗。b.配制好的溶液放于4度冰箱保存，使用时用纯水稀释至1×使用。1.21×转膜液配方〔1L〕留意事项：a.参与适量的纯水，用磁力转子将各组分溶解后参与甲醇溶液，最终Tris-Base24....
中范围蛋白质分子量标准(14.3-97.4KD)V5235S200μg国产80元分子量大小:〔14.3、21.5、31、40、42.7、55、66.2、97.4KD〕分子量大小:〔36、45、55、66、84、97、116、205KD〕宽范围蛋白质分子量标准〔6.5-205KD)M4038-120次Sigma280元宽范围蛋白质分子量标准〔6.5-205KD)M4038-15×20次Sigma1266元分子量大小:〔6.5、14.2、20、24、29、36、45、55、66KD〕(一)蛋白质电泳1.请参照常规电泳操作.2.分子量标准:可选择一般分子量标准...
WesternBlot详解Western免疫印迹〔WesternBlot〕是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进展检测。对表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进展检测，对基因的表达产物，可通过融合局部的抗体检测。该文主要通过以下几个方面来具体地介绍一下WesternBlot技术。Contents：（1）原理（2）分类i.放射自显影ii.底物化学发光ECLiii.底物荧光ECFiv.底物DAB呈色（3）主要试剂（4）主要程序（5）试验常见的问题指南1.参考书推举2.针对样品的常见...
WesternBlot试验技术手册WesternBlot是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白依据分子量大小分开，然后转移到固相载体〔杂交膜〕上，然后通过抗原抗体反响检测杂交膜上的靶蛋白是否存在，从而检测到靶蛋白在待检测样本中的表达状况。目前WesternBlot已经是蛋白检测的最常用和成熟的技术之一.一、WesternBlot根本操作流程图细胞/组织蛋白提取↓蛋白定量、蛋白变性上样、电泳↓一转膜↓封闭↓孵育一抗↓洗膜孵育二抗↓洗膜底物孵育↓曝光...
