分子生物学基础第一章绪论Introduction1.1分子生物学基本概念1.2本课程目的与教学安排1.3DNA发现的历史（1）分子生物学（molecularbiology)，区别于普通生物学，是从分子水平研究生物大分子的结构与功能，从而阐明生命科学本质的科学。（2）主要研究对象为遗传物质-核酸（DNA、RNA）以及蛋白质等。（3）1953年沃森、克里克提出DNA分子的双螺旋结构模型是分子生物学诞生的重要标志。1.1分子生物学基本概念Iconsidermolecularbiol...
实验十一Western杂交（WesternBlot）一、【实验目的】了解蛋白质印迹的方法和操作要点。二、【实验原理】蛋白质印迹法一般是将SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质分子区带通过一定的方法转移并固定到一种特殊的载体上，使之成为稳定的、经得起各种处理并容易检出的固定化生物大分子，常用的转移方法有电转移、毛细管转移等，常用载体有硝酸纤维素膜（NC膜）、PVDF膜、尼龙膜等，它们与生物大分子都是共价结合。然后通过特异性...
实验十Northern杂交（NorthernBlot）一、【实验目的】(a)掌握NorthernBlot的基本原理(b)操作Northernblot的基本步骤二、【基本原理】Northern印迹是一种利用DNA与RNA进行分子杂交来检测特异性RNA的技术主要用来检测特定基因在转录水平上的动态表达。首先,将提取好的RNA(或mRNA)混合物通过琼脂糖凝胶电泳按它们的大小和分子量进行分离，分离出来电泳凝胶中的RNA转至尼龙膜或硝酸纤维素膜上，再与放射性或者其他非同位素化学标记...
实验八胚胎原位杂交一、【实验目的】(a)掌握胚胎原位杂交原理(b)应用斑马鱼整胚原位杂交二、【基本原理】RNA整胚原位杂交主要用于检测特定转录子在胚胎内的时空表达模式的杂交技术，它利用了核苷酸碱基互补配对的特性。样品首先用PFA固定从而使目的mRNA保留在原组织中，固定后用蛋白酶K处理，打开细胞膜使探针能够进入细胞（处理时间和样品有关，例如样品的厚度、年龄）。探针可以是标记的互补DNA,现在最常见的是与目的基因互补...
信号分子细胞信号转导信号分子信号分子信号分子一、细胞间信息物质定义：细胞间信息物质(extracellularsignalmolecules)是由细胞分泌的调节靶细胞生命活动的化学物质的统称，又称作第一信使。信号分子化学本质为:*蛋白质和肽类（如生长因子、细胞因子、胰岛素等）*氨基酸及其衍生物（如甘氨酸、甲状腺素、肾上腺素等）*类固醇激素（如糖皮质激素、性激素等）*脂酸衍生物（如前列腺素）*气体（如一氧化氮、一氧化碳）等信号分子...
实验九Southern杂交（SouthernBlot）一、【实验目的】(a)掌握SouthernBlot的基本原理(b)操作Southernblot的基本步骤二、【基本原理】Southern印迹是一种基于核酸特别是基因组DNA与DNA探针碱基互补配对特性的杂交技术，它是用来显示基因组DNA的状态，包括基因拷贝数和基因突变。该技术首先用一组特定的限制性内切酶将基因组DNA酶切成小的片段，再用琼脂糖凝胶电泳按照片段大小分离这些酶切产物，通常低电压和温度能够得到更好的...
转座重组由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座(transposition)。大多数基因在基因组内的位置是固定的，但有些基因可以从一个位置移动到另一位置。这些可移动的DNA序列包括插入序列和转座子。转座重组BarbaraMcClintock(1902-1992),Biologist.NobelPrizefordiscoveringjumpinggenesincorn---theninbacteriaandhumans.ColdSpringHarborLaboratory.转座重组插入序列(insertionsequences,IS)组成：IRTransposase...
第五章分子生物学研究法（上）DNA、RNA及蛋白质操作技术扉页：当你进入实验室时，要像脱去外衣那样放下你的想象力，因为实验操作中不能有一丁点儿的想象，否则，你对事物的观察就会受影响；当你翻开书本的时候，你又必须尽可能展开想象的“翅膀”，否则，你就不可能走在别人的前面。基因操作主要包括DNA分子的切割与连接、细胞转化、核酸序列分析以及基因人工合成、表达、定点突变和PCR扩增等，是分子生物学研究的核心技术。基...
载体定义为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。常用载体：质粒DNA噬菌体DNA病毒DNA克隆载体(cloningvector)：为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体称为克隆载体。穿梭载体(shutllevector)：可从一个受体菌转入另一受体菌中复制并遗传。表达载体(expressionvector):为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计的载体称为表达载体。（一）克隆载体具备在原核细...
分子生物学常用试剂的配制1.LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入：细菌培养用酵母提取物（bacto-yeastextract）5g细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10gNaCl10g摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min。LB琼脂平板的配制：先按上述配方配制液体培养基，临高压灭菌前加入琼脂...
实验前基本训练一、实验室守则及基本要求1.穿着整洁，进入实验室必须穿专用实验服。2.实验室内严禁吃食物，不高声谈话及随便走动。3.实验前必须认真预习，熟悉实验的内容，了解实验过程中需使用的仪器性能，了解相应的操作技术。实验中应严格按操作规程进行，认真操作，仔细观察，及时记录实验现象及结果。实验结束后，认真分析和总结实验结果，认真做好每一次的实验报告。4.实验器具应保持清洁，任何使用过的器具及玻璃器皿必...
分子杂交技术ＤＮＡ的变性（DNAdenaturation）在某些理化因素作用下，DNA分子互补碱基对之间的氢键断裂，使ＤＮＡ双螺旋结构松散，变成单链，即为ＤＮＡ变性。实验室最常用的方法是加热。ＤＮＡ的复性(DNArenaturation)变性ＤＮＡ在适当条件下，两条互补链可重新配对，恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。热变性的ＤＮＡ经缓慢冷却后即可复性，又称退火(annealing)。核酸分子杂交DNA复性时，如果将不同种类的DNA单链分子...
目录直接修复目录嘧啶二聚体的直接修复烷基化碱基的直接修复无嘌呤位点的直接修复单链断裂的直接修复目录UVUVPotolyasePotolyase（（光修复酶））300-500nm300-500nm嘧啶二聚体的直接修复目录烷基化剂甲基磺酸乙酯（EMS）对碱基的修饰目录烷基化碱基的直接修复目录DNA链上嘌呤的脱落造成无嘌呤位点，能被DNA嘌呤插入酶（insertase）识别结合，在K+存在的条件下，催化游离嘌呤或脱氧嘌呤核苷插入生成糖苷键，且催化...
翻译概述翻译蛋白质的生物合成，即翻译，就是将核酸中由4种核苷酸序列编码的遗传信息，通过遗传密码破译的方式解读为蛋白质一级结构中20种氨基酸的排列顺序。翻译蛋白质生物合成体系：1.基本原料：20种编码氨基酸2.模板：mRNA3.适配器：tRNA4.装配机：核糖体5.主要酶和蛋白质因子等6.能源物质：ATP、GTP7.无机离子：Mg2+、K+54%休息一下！
蛋白质的加工和靶向运输前胰岛素原的后加工一级结构的修饰伴侣素系统促进蛋白质折叠过程高级结构的修饰蛋白质的不同分拣路径蛋白质合成后被靶向输送至细胞特定部位GünterBlobel信号假说各种蛋白质在细胞中的最终定位是由蛋白质本身所具有的特定氨基酸序列决定的。这些特殊的氨基酸序列起着一种信号向导的作用，因此被称为信号序列。信号序列能够被细胞中的特殊成分识别，由此启动定向和分拣的过程。一个蛋白质如果缺乏任何一种...
目录碱基切除修复核苷酸切除修复切除修复目录碱基切除修复（baseexcisionrepair）目录碱基错配修复（mismatchrepair）错配是指非Watson-Crick碱基配对。碱基错配修复也可被看作是碱基切除修复的一种特殊形式，主要负责纠正：①复制与重组中出现的碱基配对错误；②因碱基损伤所致的碱基配对错误；③碱基插入；④碱基缺失。目录错配修复系统组成:DNA腺嘌呤甲基化酶(m6A甲基化酶)DNApolymeraseⅢ填补单链DNA缺口Helica...
哺乳动物细胞中蛋白质的降解异常蛋白短周期蛋白内质网相关蛋白膜蛋白细胞外蛋白泛素-蛋白酶体途径溶酶体途径氨基酸小肽80-90%10-20%自噬蛋白不需要ATP供能需要ATP供能溶酶体途径1.与食物泡融合，将细胞吞噬进的食物或者致病菌等大颗粒物质消化成生物小分子，残渣通过胞吐作用排出细胞；2.在细胞分化过程中，某些衰老的细胞器和生物大分子等陷入溶酶体内并被消化掉，这是机体自身更新组分的需要。溶酶体的功能泛素-蛋白酶体途径1...
Molecularbiology分子生物学•《英汉对照分子生物学导论》（Sylvainw.Lapan）Textbook朱玉贤，李毅等.《现代分子生物学》高教出版社.2008References谢建坤，王曼莹编《分子生物学》科学出版社.2013References分子生物学(InstantNotesinMolecularBiology,3rdEditionbyP.C.Turner）GenesXI(BenjaminLewin,科学出版社，2012年12月31日)Chapter3TranscriptioninProkaryotesChapter4TranscriptioninEukaryotesChapter5mRNAmodi...
Molecularbiology分子生物学朱玉贤，李毅等.《现代分子生物学》高教出版社.2008教材及参考教材谢建坤，王曼莹编《分子生物学》科学出版社.2013References分子生物学(InstantNotesinMolecularBiology,3rdEditionbyP.C.Turner）GenesXI(BenjaminLewin,科学出版社，2012年12月31日)Chapter3生物信息的传递（上）Chapter4生物信息的传递（下）Chapter5基因的表达和调控（上）Chapter2染色体与DNAChapter6基因的表达和调控...
第四章核苷酸和核酸磷酸二酯键与多核苷酸2碱基的性质和核酸结构3DNA结构4RNA的种类和结构5核酸的变性、复性和杂交6碱基、核苷和核苷酸1第四章核苷酸和核酸DAN一级结构测定与DNA的化学合成基因和基因组DNA超螺旋和染色质结构91011核酸的化学反应和酶法修饰7核酸酶和DNA限制性内切酶8第一节碱基、核苷和核苷酸•一、碱基、核苷和核苷酸•二、核苷酸的生物学功能第一节碱基、核苷和核苷酸第一节碱基、核苷和核苷酸第一节碱基、核苷...
