目的基因的制备技术：化学合成化学合成这种方法主要适用于已知核苷酸序列的、分子量较小的目的基因的制备。特点：不需要模板DNA序列可以说是一种从无到有的合成，例如GCTA四核苷酸序列：1、先将G的5’端利用特定进行保护，3’暴露；2、然后加入3’端保护的C，并进行合成反应，这样就可以合成3‘CG5’；3、然后去掉C的3‘保护基团，再加入3’端受保护的T，继续缩合；这样依次进行，最后合成所需要的核苷酸序列。这与PCR的原理...
目的基因的制备技术：PCRPCR技术（PolymeraseChainReaction）聚合酶链反应：将微量的特异的DNA片段在体外快速扩增的技术。原理：以目的DNA分子为模板，以一对分别与两模板3’末端互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成。不断重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。模板DNA特异性引物(一对)DNA聚合酶(耐热)dNTP含有Mg2+PCR体系基本成分5Prim...
目的基因的制备技术：cDNA文库DNA克隆-DNACloning克隆(clone)：来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。获取同一拷贝的过程称为克隆化(cloning)，即无性繁殖。分子克隆：细胞克隆：动物克隆：克隆的不同层面DNA克隆应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）与载体DNA连接合成一具有自我复制能力的DNA分子，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞...
目录色氨酸操纵子及衰减子目录UUUUUUUU调节区结构基因trpROP前导序列衰减子区域UUUU前导mRNA1234衰减子结构第10、11密码子为trp密码子终止密码子14aa前导肽编码区:包含序列1形成发夹结构能力强弱：序列1/2>序列2/3>序列3/4trp密码子UUUU1、色氨酸操纵子结构目录2、色氨酸浓度低时OPtrpR调节区结构基因RNA聚合酶EDCBA结构基因大量转录自身合成Trp阻遏蛋白目录Trp3、色氨酸浓度高时OPtrpR调节区结构基因RNA聚合酶EDCBA结构基因无...
目录真核基因表达调控特点目录1、真核细胞基因表达的多层次性目录2、染色质结构与真核基因表达活性染色质(activechromatin)具有转录活性的染色质超敏位点（hypersensitivesite)当染色质活化后，常出现一些对核酸酶（如DNaseI）高度敏感的位点2.1转录活化的染色质对核酸酶极为敏感目录染色质中的超敏位点（hypersensitivesite)目录2.2转录活化染色质的组蛋白发生改变目录目录组蛋白修饰对染色质结构与功能的影响组蛋白氨基酸...
目录基因表达与基因表达调控的基本概念与特点目录目录1、基因表达的基本概念基因表达出蛋白质或RNA的过程，包括转录和翻译。基因表达(geneexpression)基因表达调控（regulationofgeneexpression）就是指细胞或生物体在接受内外环境信号刺激时或适应环境变化的过程中在基因表达水平上做出应答的分子机制。目录2、基因表达特点2.1基因表达的时间特异性按功能需要，某一特定基因的表达严格按一定的时间顺序发生，称之为基因...
目录乳糖操纵子目录1、乳糖的代谢目录2、乳糖代谢酶的发现1940年，法国科学家JacquesMonod开始研究E.coli乳糖代谢的一些特征，并观察到乳糖和其他半乳糖苷可以诱导β-半乳糖苷酶的产生。进一步研究发现突变株“crypticmutants”虽然能产生β-半乳糖苷酶，但是却不能在以乳糖为唯一碳源的培养基中生长。他们用放射性标记技术研究发现，野生型菌在乳糖诱导后会摄取半乳糖苷，而crypticmutants突变型细菌不能。进而证明在在野生型...
qRT-PCR内参基因的评价及数据分析主要内容内参基因的评价qRT-PCR的引物设计及评价qRT-PCR的数据分析•内参基因具备的条件内参基因的评价表达量要稳定；表达丰度为中度或高度，避免低度；表达的丰度与目标基因接近；http://www.sigmaaldrich.com/life-science/molecular-biology/plant-biotechnology/plant-molecular-biology/control-primers-for-arabidopsis.html•内参基因再评价的必要性内参基因的评价传统内参基因主...
真核生物转录水平上的基因表达调控基因：产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列。顺式作用元件定义：影响自身基因表达活性的非编码DNA序列，组成基因转录的调控区。例：启动子、增强子、沉默子等。（1）启动子（2）增强子enhancer：结构基因远距离处，能够使与它连锁的基因转录频率明显增加的DNA序列。顺式作用元件（3）绝缘子Insulator：在基因组内建立独立的转录活性结构域的边界DNA序列称为绝缘子/隔离子（insulato...
真核生物DNA水平上的基因表达调控染色质结构与调控染色质类型•常染色质：间期细胞核内染色质纤维折叠压缩程度低，相对处于伸展状态，用碱性染料染色时着色浅的那些染色质。•异染色质：间期细胞核中，染色质纤维折叠压缩程度高，处于聚缩状态，用碱性染料染色时着色深的那些染色质。常染色质与异染色质的转变常染色质异染色质甲基化CpG未甲基化CpG核小体DNA的甲基化DNA甲基化DNA甲基化酶DNA甲基化抑制基因转录的机理DNA甲基化...
真核基因表达调控的一般规律1.真核细胞中一条成熟mRNA只能翻译一条多肽链，而原核生物是多顺反子，是多基因的操纵子形式。2.真核细胞的DNA与组蛋白和大量非组蛋白结合，只有一小部分DNA裸露。3.高等真核细胞DNA中大部分不转录，真核基因是断裂结构。4.真核生物能够有序地根据生长发育阶段的需要进行DNA片段重排，还能在需要时增加细胞内某些基因的拷贝数，这种能力在原核生物中是极为鲜见的。5.在原核生物中，转录的调控区很小...
原核基因表达调控的概述一、基因表达的概念基因表达：从DNA到蛋白质的过程。对这个过程的调节就称为基因表达调控。rRNA、tRNA编码基因转录合成RNA的过程也属于基因表达。组成性表达(constitutiveexpression)适应性表达(adaptiveexpression）二、基因表达的方式三、原核基因表达调控环节1、转录水平上的调控—操纵子模式（transcriptionalregulation）2、转录后水平上的调控（post-transcriptionalregulation）①mRNA加工成熟水...
基因的结构与功能基因的结构原核生物的基因连续的，合成RNA后不需要剪接加工ayz结构基因非结构基因非结构基因操纵子(operon)定义：原核生物能转录出一条mRNA的几个功能相关的结构基因及其上游的调控区域，称为一个操纵子Operon。组成：信息区结构基因----2个以上的编码序列。调控区启动序列----（启动子Promoter)；操纵序列----（Operator)。其他调节序列----如CAP结合位点。PS1S2S3启动子OPromoter调控序列结构基因操纵子...
第五章基因的转录和转录后加工第一节转录的概述基因在五个不同层次上的调控：转录前调控、转录调控、转录后调控、翻译调控、翻译后调控一、基因的编码链和有意义链单链DNA病毒：•复制出的互补链——负链•进入噬菌体颗粒的单链DNA——正链单链RNA病毒：•单链RNA作为mRNA或与mRNA序列相同——正链RNA•不直接作为mRNA，而是通过RNA复制产生的互补链来作为mRNA——负链RNA二、RNA聚合酶催化转录的三个阶段•起始、延伸、终...
基因的概念及分类基因的概念1865年Mendel提出遗传因子学说。1900年Vries,Tschermak,Corrensen；重新证实了Mendel的遗传因子学说。1903年Sutton和Boveri提出了遗传因子在染色体上。基因的概念GENOSWilhelmLudwigJohannsen(1857–1927)1909年基因gene——根据希腊文“给予生命”之义，创造了基因（gene）一词基因型：genotype表型：phenotype基因的概念1936年，“链孢霉中生化反应的遗传控制”。GeorgeW.Beadle(1903-1989)E...
基因表达调控基因表达调控（（RegulationofGeneExpressioRegulationofGeneExpressionn））一、基因表达的概念一、基因表达的概念基因表达是指生物体基因组中结构基因所携带的基因表达是指生物体基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录及翻译等一系列过程，合成特定遗传信息经过转录及翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质或的蛋白质或RNARNA，进而发挥其特定生物学功能的全，进而发挥其特定生物学功能的全过程。过程。基因表...
第三章基因组和基因第一节基因组与C值矛盾一、基因组一个生物物种所有染色体的总和（细胞遗传学）所有核酸分子的总和（分子遗传学）所有基因的总和（经典遗传学）指导一个物种的结构与功能的所有遗传信息的总和（现代分子生物学理论）二、C值一个单倍体基因组的DNA含量。单位为dolton或uug或bp1uug=1pg=6.1×1011dolton对每一个物种，C值是恒定的。三、C值矛盾一般而言，随着生物的进化，生物体的结构与功能越复杂，其C...
真核基因的结构第一节1.真核基因包含编码蛋白质或RNA的编码序列及其与之相关的非编码序列。2.真核基因结构最突出的特点是其不连续性。一、真核基因的基本结构3.高等真核生物绝大部分编码蛋白质的基因都有内含子，但组蛋白编码基因例外。编码rRNA和一些tRNA的基因也都有内含子。一、真核基因的基本结构4.外显子与内含子接头处有一段高度保守的序列，即内含子5′末端大多数以GT开始，3′末端大多数以AG结束，这一共有序列是真核基...
