实验六重组质粒DNA的提取及插入酶切鉴定一、【实验目的】1、学习和掌握质粒的相关知识、了解从细菌中提取质粒的原理。2、通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒、熟悉质粒提取的操作步骤。3、了解分离小分子DNA与基因组DNA的原理与区别。4、掌握质粒DNA的鉴定方法。基础背景知识：（1）大肠杆菌（E.coli）大肠杆菌是人类最熟悉的微生物之一。大肠杆菌细胞质中的质粒是一种环状DNA，出入细胞较为容易。加之它结构简单，繁殖快，...
实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化一、【实验目的】(1)了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义；(2)学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞和外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术。图5-2CaCl2处理产生感受态细胞二、【实验原理】感受态细胞(Competentcells)受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competentcell)...
质粒DNA的制备限制性内切酶切割重组质粒朱文博中山医学院基因克隆•定义：经无性繁殖获得基因许多相同拷贝的过程。通常是将单个基因导入宿主细胞中复制而成。基因工程•定义：实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称为基因工程，又称重组DNA技术。•基因克隆示意图ÔØÌåDNA(ÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐøÇпª)Ä¿µÄ»ùÒò£«ËÞÖ÷ϸ°û£«ÖØ×éÌåÒÑת»¯µÄËÞÖ÷ϸ°ûÑôÐÔ¿Ë¡Öê...
质粒构建流程一、引物设计1）取得目的基因序列，可选用数据库NCBI2）软件分析目的基因可用酶切位点。使用primer5分析出序列不包含的酶切位点，即为可用没切位点。3）选择载体。根据转染细胞和实验室资源，选择合适载体。如pcDNA3.1(+)，4）选择酶切位点。对照目的基因可用酶切位点和载体上的酶切位点，选择二者共有的作为备选。载体上两个酶切位点的距离应有几十bp以上，选实验室常用酶切位点。5）使用primer5设计目的基因引物...
质粒载体的概况及制备质粒的定义、命名1质粒的基本特性2质粒的分类3质粒载体的概况（一）质粒的定义、命名质粒的定义、命名：•定义：质粒（plasmid）是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的，与细菌或细胞共生的遗传成分。•命名：小写字母p代表质粒，两个大写字母代表发明者，后面接实验编号。★质粒不是细菌生长所必须的★可赋予细菌抵御外界因素不利影响的能力★分子量在1~200kb之间质粒（plasmid）特点：能在宿主细胞内独...
1质粒构建11孟庆明2019-04-092主要内容质粒的概念及特点质粒构建的基本步骤和原理3一、质粒的概念带外源核酸进入宿主细胞，并在其中进行独立和稳定的自我复制的带外源核酸进入宿主细胞，并在其中进行独立和稳定的自我复制的核酸分子核酸分子。基因工程中广泛应用的载体多来自人工改造的细菌质粒、噬菌体或病毒核酸。基因工程中广泛应用的载体多来自人工改造的细菌质粒、噬菌体或病毒核酸分子，但某些分子，但某些RNARNA分子...
外源DNA和质粒载体的连接反应外源DNA片段和线状质粒载体的连接,也就是在双链DNA5磷酸和相邻的3羟基之间形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5磷酸,可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化,则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口,当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的5磷酸和3羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的DNA连接酶催化,这两种酶就是大肠杆菌DNA连接...
碱裂解法提取质粒一、基本概念1(质粒:质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。许多细菌除了染色体外，还有大量很小的环状DNA分子，这就是质粒(plasmid)。质粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称...
